### 人肝癌细胞HepG2培养指导手册
尊龙凯时为您提供人肝癌细胞HepG2的培养及管理指导。以下内容详细描述了细胞的培养条件、操作步骤及注意事项，旨在帮助您顺利进行细胞实验。
#### 一、细胞培养条件
**细胞名称**: 人肝癌细胞HepG2
**生长特性**: 贴壁生长
**冻存条件**: 无血清冻存液（货号：C7001）
**培养体系**: MEM + 10% FBS + 1% 双抗
**传代方法**: 初次建议1:2的传代比例，若传代情况稳定，建议每2天更换培养基。请使用无菌离心管收集培养基样本以便对比，如果对比效果不佳，请考虑直接购买尊龙凯时的完全培养基。
#### 二、细胞处理流程
收到细胞后，在良好状态下填满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳处理方法。收到细胞后，请用75%酒精对细胞瓶外表进行消毒，然后在超净台内做好无菌操作。细胞瓶需放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以启动细胞状态稳定，随后进行处理。显微镜下观察细胞生长情况并记录不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要参考依据，未提供照片默认为状态良好。
#### 三、细胞培养步骤
a. **细胞传代**：当细胞汇合度未超过80%时，收集培养液备用，继续在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，进行如下操作：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状况，若细胞变圆脱落，加入5ml完全培养基终止消化。
3. 吹打细胞吸出后，将悬液转移至15ml离心管，1000RPM下离心5分钟，去除上清，重悬细胞于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充5-8ml完全培养基，放入培养箱中继续培养。
b. **细胞冻存**：
1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，污去培养液并用PBS清洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，轻轻吹打，待细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化。
3. 吸出细胞悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
4. 去除上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。
5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，必要时可在24小时后转入液氮罐中。
c. **细胞复苏**：
1. 从液氮中取出冻存管（戴好防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，直到管内无结晶，然后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 去除上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，然后接种于T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱中养殖。
4. 经过24小时后，替换为新鲜完全培养基继续培养。
#### 四、注意事项
在运输过程中，细胞可能会因贴壁不牢而脱落，属于正常现象。请将所有培养液收集于离心管，进行1000RPM离心5分钟。再根据标准的传代程序进行细胞操作。尊龙凯时提醒您注意培养条件的严格把控，以确保细胞在实验中的最佳状态。
#### 五、售后条款
1. **细胞出现问题的重发条件**：
1. 运输过程中遇到丢失、破损的细胞，支持重发。
2. 接收到的细胞如在48小时内出现污染，需提交实验结果，确认后可重发。
3. 若细胞状态在收到后24小时内明显不佳，需提供真实照片，确认重发。
4. 细胞活性问题需在7天内确认，并使用台盼蓝染色法进行鉴定。
5. 报告不合格需提供前三天的照片及详细操作记录，尊龙凯时的技术团队将进行评估并决定责任是否在我方。
2. **不支持重发的情况**：
1. 由于客户操作不当而造成的细胞污染，尊龙凯时将不予重发。
2. 客户若未按推荐细胞培养体系操作导致状态不佳，亦不予重发。
3. 对收到细胞未及时记录并反馈的情况，尊龙凯时将无法提供重发保障。