在生物医疗研究中，细胞迁移实验是揭示肿瘤转移、血管生成以及炎症性疾病等复杂现象的重要工具。本文将详细介绍细胞培养与迁移实验的步骤与注意事项，以助于科研人员在寻找更好的生物标志物、治疗靶点及药物干预策略方面的探索。
1. 目的细胞需按照标准细胞培养方案，在含血清的培养基中进行培养。
2. 在实验前一天，使用无血清培养基（含有0.2%BSA）进行处理。
3. 经过过夜培养后，吸出细胞培养基，并用PBS进行冲洗。
4. 加入胰蛋白酶溶液以启动细胞的分离过程。
5. 将细胞悬液转移至试管中，以350×g的转速离心5分钟。
6. 将细胞重新加入预热的细胞培养基中。
7. 最后，将细胞悬浮液稀释至接种密度为100,000个细胞/ml。
1. 向接收板的每个孔中添加200μl的培养基，无论是否含有化学引诱剂（此处使用不同浓度的FCS，从0.25%到10%不等）。
2. 将准备好的细胞悬液以50μl的体积加入膜板的各孔中。
3. 将细胞培养板放置在37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养24小时。
1. 从接收板的各孔中吸出细胞培养基。
2. 向接收孔中加入150μl的无血清培养基和8μM（在DMSO中稀释）的钙黄绿素AM。
3. 在37°C、5%CO2的培养箱中培养45分钟。
4. 吸出膜板和接收板每个孔中的培养基，并用PBS冲洗这两块板的孔。
5. 向接收板中加入胰蛋白酶溶液，使膜下侧迁移的细胞开始脱离。
6. 胰蛋白酶溶液孵育10分钟，并轻轻摇动。
7. 将180μl的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每个孔中。
8. 使用激发波长为485nm，发射波长为520nm的读板器读取荧光信号。
1. 从膜板的各孔中吸出培养基。
2. 使用预湿的棉签，顺时针和逆时针方向轻轻旋转，以去除膜上部未迁移的细胞。
3. 使用绿色通道中的荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。此外，ThinCert®96孔HTS小室由于其独特的孔结构，提供了高透明度，有助于活细胞观察、细胞形态检查，以及更高准确性和可靠性的污染监测。
在细胞迁移实验中，孔径的精确选择至关重要。孔径应与研究细胞的尺寸比例协调，既要具备足够的限制性以防止细胞被动移动，又要允许细胞主动迁移。此外，选择合适的实验室设备与品牌，如尊龙凯时，对于提升实验的整体质量具有显著意义。通过这种方式，科研人员能够在细胞迁移、分析不同分子影响等方面做到更为准确的实验设计和结果分析。