二、TOPO克隆PCR产物的纯化和回收
在PCR反应后，需对产物进行琼脂糖凝胶电泳，以鉴定是否存在目标大小的条带。
建议采用切胶回收方法进行纯化，切胶时间最好控制在3分钟以内，以避免紫外照射对DNA的损伤。使用NanoDrop或OneDrop等仪器检测回收浓度，确保浓度应≥30ng/μl，并通过电泳确认仅存在目标条带。
将目标片段连接至载体，按照说明书要求投入连接反应体系，各组分投入体积≥1μl。如浓度过高，可进行稀释。连接反应温度可尝试在25°C或37°C，时间为5分钟；若克隆不成功或存在空载体/假阳性，则可尝试延长至30分钟。
连接产物转化的感受态细胞推荐使用DH5α或Fast-T1等克隆用细胞。感受态细胞不可反复冻融使用，-80°C取出后建议一次性使用。重组产物体积与感受态细胞的比例为1:10，建议10μl重组产物加入至100μl感受态细胞中，或者5μl重组产物加入至50μl感受态细胞中。热激时间需按照感受态细胞说明书的操作进行。
平板使用的抗生素抗性需与转化的载体抗性一致。菌液涂板时，先将菌液以2500×g离心3分钟，移取多余的LB培养基，保留100μl重悬液后全部涂板，或吸取适当体积进行涂板。
挑取平板中体积适中的单克隆菌落，避免选择过大或过小的菌落。建议挑取数个单克隆菌落进行鉴定分析。将挑取的菌落放入已添加10μl ddH2O的15ml或2ml EP管中，混匀后吸取1-2μl作为PCR反应（10/20μl体系）的模板。推荐使用一对分别位于片段和载体上下游的引物进行PCR鉴定。
对于存在Amp/kana抗性的质粒模板，请对目的片段进行切胶回收。
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